ⅠNkyselina ukleováinúvod
Nukleová kyselina sa delí na kyselinu deoxyribonukleovú (DNA) a kyselinu ribonukleovú (RNA), medzi ktorými sa RNA delí na ribozomálnu RNA (rRNA), messengerovú RNA (mRNA) a transferovú RNA (tRNA) podľa svojich rôznych funkcií.DNA sa koncentruje hlavne v jadre, mitochondriách a chloroforme, zatiaľ čo RNA je distribuovaná hlavne v cytoplazme.Ako materiálny základ génovej expresie hrá extrakcia nukleových kyselín mimoriadne dôležitú úlohu vo výskume molekulárnej biológie a klinickej molekulárnej diagnostike.Koncentrácia a čistota extrakcie nukleových kyselín priamo ovplyvní následnú PCR, sekvenovanie, konštrukciu vektora, štiepenie enzýmov a ďalšie experimenty.
Ⅱ Metóda extrakcie a purifikácie nukleových kyselín
① Metóda extrakcie fenolom/chloroformom
Extrakcia fenolom/chloroformom je klasická metóda extrakcie DNA, ktorá využíva hlavne dve rôzne organické rozpúšťadlá na úpravu vzoriek, rozpúšťanie nukleovej kyseliny na báze DNA vo vodnej fáze, lipidov v organickej fáze a proteínov medzi týmito dvoma fázami.Táto metóda má výhody nízkej ceny, vysokej čistoty a dobrého účinku.Nevýhodou je zložitá prevádzka a dlhá doba.
② Trizol metóda
Metóda Trizol je klasická metóda extrakcie RNA.Metóda Trizol sa po centrifugácii s chloroformom rozdelí na vodnú fázu a organickú fázu, v ktorej sa RNA rozpustí vo vodnej fáze, vodná fáza sa prenesie do novej EP skúmavky, po pridaní izopropanolu sa získa precipitácia a následne sa prečistí etanolom.Táto metóda je vhodná na extrakciu RNA zo živočíšnych tkanív, buniek a baktérií.
③ Metóda čistenia odstredivou kolónou
Metóda čistenia centrifugačnej kolóny môže adsorbovať DNA špecificky cez špeciálne adsorpčné materiály s kremíkovou matricou, zatiaľ čo RNA a proteín môžu prechádzať hladko, a potom použiť vysokú soľ s nízkym PH na kombináciu nukleovej kyseliny, elúciu s nízkou soľou s vysokou hodnotou PH na oddelenie a čistenie nukleovej kyseliny.Výhody sú vysoká koncentrácia čistenia, vysoká stabilita, nie je potrebné organické rozpúšťadlo a nízka cena.Nevýhodou je, že je potrebné odstreďovať krok za krokom, viac operačných krokov.
④ Metóda magnetických guľôčok
Metóda magnetických guľôčok spočíva v rozdelení vzorky bunkového tkaniva cez lyzát, uvoľnení nukleovej kyseliny vo vzorke a potom sa molekuly nukleovej kyseliny špecificky adsorbujú na povrchu magnetickej guľôčky, zatiaľ čo nečistoty, ako sú proteíny a cukry, zostanú vo vzorke. kvapalina.Prostredníctvom krokov štiepenia bunkového tkaniva, viazania magnetických guľôčok s nukleovou kyselinou, premývania nukleovej kyseliny, elúcie nukleovej kyseliny atď. sa nakoniec získa čistá nukleová kyselina.Výhodou je jednoduchá obsluha a krátka doba použitia, bez nutnosti stupňového odstreďovania.Má nízke technické požiadavky a môže realizovať automatickú a hromadnú prevádzku.Špecifická kombinácia magnetických guľôčok a nukleovej kyseliny robí extrahovanú nukleovú kyselinu s vysokou koncentráciou a čistotou.Nevýhodou je, že súčasná trhová cena je pomerne drahá.
⑤ Iné metódy
Okrem vyššie uvedených štyroch metód existujú varné krakovanie, metóda koncentrovanej soli, metóda aniónového detergentu, ultrazvuková metóda a enzymatická metóda atď.
Ⅲ Typ extrakcie nukleovej kyseliny
Foregene má poprednú svetovú platformu Direct PCR, dvojstĺpcovú platformu na izoláciu RNA (len DNA + iba RNA).Medzi hlavné produkty patria súpravy na izoláciu DNA/RNA, reagencie PCR a Direct PCR séria molekulárnych lab reagencií.
① Celková extrakcia RNA
Vzorky extrakcie celkovej RNA zahŕňajú krv, bunky, tkanivá zvierat, rastliny, vírusy atď. Vysoká čistota a vysoká koncentrácia celkovej RNA sa dá získať extrakciou celkovej RNA, ktorú možno použiť pri RT-PCR, čipovej analýze, in vitro translácii, molekulárne klonovanie, Dot Blot a iné experimenty.
Súvisiace s foregenomSúpravy na izoláciu RNA
Súprava na izoláciu zvieracej celkovej RNA--Rýchlo a efektívne extrahujte vysoko čistú a kvalitnú celkovú RNA z rôznych živočíšnych tkanív.
Súprava na izoláciu celkovej RNA buniek--Vysoko purifikovanú a kvalitnú celkovú RNA je možné získať z rôznych kultivovaných buniek za 11 minút.
Súprava na izoláciu rastlinnej celkovej RNA--Rýchlo extrahujte vysokokvalitnú celkovú RNA zo vzoriek rastlín s nízkym obsahom polysacharidov a polyfenolov.
Súprava na izoláciu vírusovej RNA--Rýchlo izolujte a purifikujte vírusovú RNA zo vzoriek, ako je plazma, sérum, telesné tekutiny bez buniek a supernatanty bunkových kultúr.
② Extrakcia genómovej DNA
Vzorky extrakcie genómovej DNA zahŕňajú pôdu, výkaly, krv, bunky, tkanivá zvierat, rastliny, vírusy atď. Extrakciu genómovej DNA možno použiť pri štiepení enzýmami, konštrukcii knižnice DNA, PCR, príprave protilátok, hybridizačnej analýze Western blot, génových čipoch, vysoko -priepustné sekvenovanie a iné experimenty.
Súvisiace s foregenomSúpravy na izoláciu DNA
Súprava na izoláciu DNA živočíšneho tkaniva--Rýchla extrakcia a purifikácia genómovej DNA z viacerých zdrojov, ako sú živočíšne tkanivá, bunky atď.
Krvná DNA Midi Kit (1-5 ml)--Rýchlo očistite vysokokvalitnú genómovú DNA z antikoagulovanej krvi (1-5ml).
Bukálny tampón/FTA karta na izoláciu DNA--Rýchlo vyčistite vysokokvalitnú genómovú DNA zo vzoriek bukálneho výteru/FTA karty.
Súprava na izoláciu rastlinnej DNA--Rýchlo purifikujte a získajte vysokokvalitnú genómovú DNA zo vzoriek rastlín (vrátane polysacharidov a polyfenolových vzoriek rastlín)
③ Extrakcia plazmidu
Plazmid je druh kruhovej malej molekuly DNA v bunkách, ktorá je bežným nosičom rekombinácie DNA.Metódou extrakcie plazmidu je odstránenie RNA, oddelenie plazmidu od bakteriálnej genómovej DNA a odstránenie proteínu a iných nečistôt, aby sa získal relatívne čistý plazmid.
Všeobecná plazmidová mini súprava- Rýchlo čistite vysokokvalitnú plazmidovú DNA z transformovaných baktérií pre rutinné experimenty molekulárnej biológie, ako je transformácia a štiepenie enzýmov
④ Iné typy extrakcie, extrakcia miRNA atď.
Súprava na izoláciu zvieracej miRNA--Rýchlo a efektívne extrahujte malé fragmenty RNA 20-200nt miRNA, siRNA, snRNA z rôznych živočíšnych tkanív a buniek
Ⅳ Požiadavky na extrakciu a čistenie nukleových kyselíns
① Na zabezpečenie integrity primárnej štruktúry nukleovej kyseliny.
② Znížte interferenciu proteínov, cukrov, lipidov a iných makromolekúl
③ Vo vzorkách nukleových kyselín by nemalo byť žiadne organické rozpúšťadlo alebo vysoká koncentrácia kovových iónov, ktoré môžu inhibovať enzým.
④ Pri extrakcii DNA by sa mala eliminovať kontaminácia RNA a inou nukleovou kyselinou a naopak.
Čas odoslania: 24. novembra 2022
